QIAGEN Ni-NTA Agarose現貨30210/30230/30250

A Agarose是親合層析用基質(zhì)，用于純化帶有His標簽的重組蛋白。His標簽上的組氨酸殘基能高特異性的結合到固定的鎳離子上。細胞裂解上清液上樣到純化基質(zhì)上，His-tagged蛋白結合，其他蛋白則流過(guò)基質(zhì)。洗滌后，His-tagged蛋白可在天然或變性條件下洗脫。

QIAGEN Ni-NTA Agarose現貨30210/30230/30250

Ni-NTA Agarose是親合層析用基質(zhì)，用于純化帶有His標簽的重組蛋白。His標簽上的組氨酸殘基能高特異性的結合到固定的鎳離子上。細胞裂解上清液上樣到純化基質(zhì)上，His-tagged蛋白結合，其他蛋白則流過(guò)基質(zhì)。洗滌后，His-tagged蛋白可在天然或變性條件下洗脫。

• 蛋白質(zhì)
• Crystallization2
• 蛋白制備39
• 蛋白穩定3
• 蛋白結晶9
• 蛋白表達8

Ni-NTA Agarose

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利用重力流層析純化His-tagged蛋白

• 一步純化就可從細胞裂解液中得到純度大于95%的蛋白
• 高親和力和高結合能力
• 可以選擇在天然或變性條件下純化蛋白
• 預先加載的即用型基質(zhì)適合任何規模的蛋白純化
• 提供自動(dòng)純化和檢測的方法

Ni-NTA Agarose是親合層析用基質(zhì)，用于純化帶有His標簽的重組蛋白。His標簽上的組氨酸殘基能高特異性的結合到固定的鎳離子上。細胞裂解上清液上樣到純化基質(zhì)上，His-tagged蛋白結合，其他蛋白則流過(guò)基質(zhì)。洗滌后，His-tagged蛋白可在天然或變性條件下洗脫。

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在天然條件下一步純化蛋白。

在天然條件下純化蛋白。人血清應答因子（SRF）在帶有牛痘病毒載體的HeLa細胞中表達，使用Ni-NTA Agarose以及在洗滌和洗脫步驟中不同濃度的咪唑純化。銀染法使得蛋白可見(jiàn)。CL：細胞裂解物；FT：流過(guò)部分；W1: 0.8 mM洗滌液；W2 & W3: 8 mM 洗滌液；W4 & W5: 40 mM 洗滌液；E1 & E2: 80 mM 洗脫液。（數據由德國H. Stunnenberg, EMBL, Heidelberg提供。）

Performance

Ni-NTA Agarose中的Ni-NTA與Sepharose CL-6B support偶聯(lián)，具有強結合能力，非特異性結合少（參見(jiàn)"One-step purification under native conditions"）。這種材料對于多數的生產(chǎn)規模和柱純化具有的可操作性。Ni-NTA Agarose可單獨訂購，也包含在QIAexpress Kits中。QIAexpress Kits是適用于大腸桿菌His-tagged蛋白高效表達和純化的完整試劑盒。

Principle

QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System基于獲得的Ni-NTA（氨基三乙酸鎳）樹(shù)脂，對含有6個(gè)或以上組氨酸殘基（連續或交替）親合標簽的蛋白選擇能力強。該技術(shù)可在天然或變性條件下，從所有表達體系中一步純化幾乎所有的His-tagged蛋白。NTA含有四個(gè)鎳離子螯合位點(diǎn)，與鎳的結合能力比其他僅有三個(gè)金屬螯合位點(diǎn)的金屬螯合純化方法的結合能力強。多出的一個(gè)螯合位點(diǎn)可防止鎳離子脫落，因此具有更強的結合能力，蛋白純度比金屬螯合純化方法的蛋白純度高。QIAexpress技術(shù)可用于從桿狀病毒、哺乳動(dòng)物細胞、酵母和細菌等各種表達體系中純化His-tagged蛋白。

Procedure

His-tagged蛋白的純化包括四個(gè)步驟：裂解、結合、洗滌和洗脫（參見(jiàn)Protein purification with the Ni-NTA protein purification system）。使用QIAexpress 技術(shù)純化重組蛋白無(wú)需依賴(lài)于蛋白的三維結構或6xHis標簽。因此可實(shí)現在天然或變性條件下，從稀釋溶液或細胞裂解液中一步純化蛋白?？墒褂脧娮冃詣┖拖礈靹└咝芙夂图兓荏w、膜蛋白和形成包涵體的蛋白。洗滌緩沖液中可包含有能高效去除非特異性結合產(chǎn)物的試劑（見(jiàn)表）。在溫和條件下加入100–250 mM咪唑作為競爭性洗脫試劑或降低pH值，可洗脫得到純化蛋白。