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LightShift™ 化學(xué)發(fā)光 EMSA 試劑盒

Thermo Scientific LightShift 化學(xué)發(fā)光 EMSA 試劑盒是一種非?？煽?、靈敏的電泳遷移率變動(dòng)實(shí)驗 (EMSA) 系統，用于鑒定和表征蛋白-DNA 結合相互作用。該試劑盒包括用于設置和定制 DNA 結合反應的試劑、用于檢測試劑盒系統的一組 DNA 和蛋白提取物、用于生物su標記 DNA 靶標的穩定鏈霉su親和素-HRP 偶聯(lián)物以及用于檢測的一種極其靈敏的化學(xué)發(fā)光底物模塊。

LightShift 化學(xué)發(fā)光 EMSA 試劑盒的特點(diǎn)：

•非常適合檢測細胞核提取物中的低豐度蛋白
• 靈敏度超過(guò)放射性和di高辛方法
• 與先前為常用 DNA-蛋白相互作用建立的結合條件兼容
• 包括 EBNA 控制系統以幫助新用戶(hù)開(kāi)發(fā)工作檢測方法并了解用于確認結合相互作用特異性的方法

LightShift EMSA 檢測的原理類(lèi)似于 Western 印跡。生物su末端標記的雙螺旋 DNA 與細胞核提取物或純化因子一起孵育并在天然凝膠上電泳。然后快速（30 分鐘）將 DNA 轉印到陽(yáng)性尼龍膜上，進(jìn)行紫外交聯(lián)，用鏈霉su親和素-HRP 偶聯(lián)物進(jìn)行探測，并與底物一起孵育?？稍谝惶靸韧瓿蓮臉擞浀降贸鼋Y果。

蛋白與 DNA 的相互作用是控制許多細胞過(guò)程的關(guān)鍵，包括 DNA 復制、重組和修復、轉錄和病毒組裝。研究基因調控和確定蛋白:DNA 相互作用的核心技術(shù)是電泳遷移率實(shí)驗 (EMSA)。

EMSA 技術(shù)基于以下觀(guān)察結果：在進(jìn)行非變性聚丙烯酰胺或瓊脂糖凝膠電泳時(shí)，蛋白:DNA 復合物的遷移速度比無(wú) DNA 分子慢。因為 DNA 遷移率會(huì )根據蛋白結合率發(fā)生偏移或速度減慢，因此，該實(shí)驗也被稱(chēng)為凝膠偏移或凝膠延遲實(shí)驗。直至 EMSA 蛋白:DNA 相互作用主要通過(guò)硝酸纖維素過(guò)濾柱結合試驗進(jìn)行研究。

進(jìn)行試驗所需的全部是純化的 DNA 靶標，該靶標已用生物su、待測蛋白提取物、尼龍膜和堿性電泳設備進(jìn)行末端標記。DNA 靶標可以在合成時(shí)加上 5' 或 3' 生物su標記，或者在合成后使用 Thermo Scientific 生物su 3' 末端 DNA 標記試劑盒（產(chǎn)品編號 89818）進(jìn)行標記。細胞核、細胞溶質(zhì)或全細胞蛋白提取物可以通過(guò)多種方法獲得，包括 Thermo Scientific NE-PER 核和細胞質(zhì)提取試劑盒（產(chǎn)品編號 78833）。

LightShift™ 化學(xué)發(fā)光 EMSA 試劑盒