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KOD -Plus-系列酶（TOYOBO）KOD-201

特征2.　通過(guò)熱啟動(dòng)提高了PCR反應效率
通過(guò)將2種抗KOD單克隆抗體預混在酶中，抑制了PCR反應前常溫狀態(tài)下的多聚酶活性和
3'→5'核酸外切酶活性（該活性是產(chǎn)生非特異性反應的主要原因）?？贵w在PCR的zui初變
性步驟即發(fā)生失活，對擴增反應沒(méi)有任何影響。
特征3.　延伸性?擴增效率的提高
對反應Buffer的組成進(jìn)行了*化的重組，使之較以往的KOD DNA polymerase延伸性?擴
增效率均有很大的提高。

特征4.　超群的耐熱性
因其耐熱性比Taq DNA Polymerase更為優(yōu)良，故可以將熱變性步驟的溫度設定值提高，對
GC-rich等容易形成高級結構的目的片段尤其適用。

特征5.　高PCR成功率【KOD -Plus- Ver.2】
對難擴增的目的片段、長(cháng)目的片段的PCR成功率比KOD -plus-更高。另外，也降低了帶入的
逆轉錄反應液對PCR反應的抑制。

KOD -Plus-系列酶（TOYOBO）KOD-201

＜幾點(diǎn)建議＞

●PCR產(chǎn)物的克隆

由于本酶的PCR產(chǎn)物已被平滑化，可用平滑末端克隆法進(jìn)行克隆。此時(shí)，如已對載體進(jìn)行了脫磷酸化處理，就需要對PCR產(chǎn)物進(jìn)行磷酸化，或使用帶5'磷酸基的引物?！×硗?，由于本酶的PCR產(chǎn)物已被平滑化，不能直接進(jìn)行TA克隆?？墒褂冒匆韵路椒ㄩ_(kāi)發(fā)的TA克隆試劑盒「TArget Clone -Plus-」。

●PCR條件的設定

酶的標準使用量為50μl反應體系1U。延伸反應在68℃條件下進(jìn)行，按1kb目的片段1min.的標準。出現拖尾條帶時(shí)，可降低MgSO₄濃度，無(wú)法確認到擴增時(shí)，可提高MgSO₄濃度。

●GC-rich模板的情況

在反應液中添加終濃度為2?5%的DMSO可得到改善。

●以RT反應液為模板的情況

過(guò)量帶入RT反應液有可能會(huì )對PCR反應產(chǎn)生抑制作用。建議帶入到PCR的RT反應液在PCR反應液的1/25以下（在1/50以下）。這樣就無(wú)需考慮RT反應液中Mg²⁺、dNTPs的影響，只要按照基本反應條件添加本酶中添付的dNTPs和MgSO₄即可。

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